Шәм һәм сабын өчен чиста Сапошниковия дивариката майы, камыш пешерүче диффузерлар өчен күпләп диффузер эфир майы ясыйлар.

кыска тасвирлау:

 

2.1. SDE әзерләү

SD ризомнары Hanherb Co. (Гури, Корея) кипкән үлән буларак сатып алынган. Завод материалларын таксономик яктан Корея Көнчыгыш медицина институты (KIOM) доктор Го-Я Чой раслады. Ваучер үрнәге (2014 SDE-6 саны) Стандарт үлән ресурслары Корея Гербарийында урнаштырылган. SD (320 г) кипкән ризомнары 70% этанол белән (2 с рефлюкс белән) ике тапкыр чыгарылды һәм аннары экстракт киметелгән басым астында тупланды. Декорация фильтрланган, лиофилизацияләнгән һәм 4 ° C сакланган. Чимал башлангыч материаллардан кипкән экстрактның уңышы 48,13% тәшкил итте (вт / с).

 

2.2. Санлы югары җитештерүчән сыек хроматография (HPLC) анализы

Хроматографик анализ HPLC системасы (Waters Co., Milford, MA, АКШ) һәм фотодиод массивы детекторы белән башкарылды. SDE HPLC анализы өчен, прим-O-глукосилцимифугин стандарты Кореяның традицион медицина индустриясе пропагандалау институтыннан (Гйонгсан, Корея) сатып алынган, һәмсек-О-глукосилхамаудол һәм 4′-O-β-Д-глюкозил-5-O-метилвисамминол безнең лабораториядә изоляцияләнде һәм спектраль анализлар белән билгеләнде, беренче чиратта NMR һәм MS.

SDE үрнәкләре (0,1 мг) 70% этанолда (10 мл) эретелде. Хроматографик аеру XSelect HSS T3 C18 баганасы белән башкарылды (4,6 × 250 мм, 5μм, Ватер К., Милфорд, Маг., АКШ). Күчмә фаза ацетонитрилдан (А) һәм судагы 0,1% кислотасы (В) агым тизлегендә 1,0 мл / мин. Күпкырлы градиент программасы түбәндәгечә кулланылды: 5% А (0 мин), 5–20% А (0-10 мин), 20% А (10–23 мин), һәм 20–65% А (23-40 мин) ). Ачыклау дулкын озынлыгы 210-400 нм сканерланган һәм 254 нм язылган. Инъекция күләме 10,0 идеμЛ. Өч хромонны билгеләү өчен стандарт карарлар соңгы концентрациядә 7,781 мг / мл әзерләнде (прим-O-глукосилсимифугин), 31,125 мг / мл (4′-O-β-Д-глюкозил-5-O-метилвисамминол), һәм 31,125 мг / мл (сек-О-глукосилхамаудол) метанолда һәм 4 ° C сакланган.

2.3. Ялкынга каршы эшчәнлекне бәяләүВитрода

2.3.1. Күзәнәк культурасы һәм үрнәк дәвалау

RAW 264.7 күзәнәкләре Америка тип культурасы коллекциясеннән алынган (ATCC, Манасс, VA, АКШ) һәм 1% антибиотик һәм 5,5% FBS булган DMEM шартларында үстерелгән. Күзәнәкләр дымлы атмосферада 5% CO2 37 ° C инкубацияләнде. Күзәнәкләрне стимуллаштыру өчен, яңа DMEM урта, һәм липополисахарид (LPS, Сигма-Алдрич Химия Ко., Сент-Луис, МО, АКШ) белән алыштырылды.μg / mL SDE булганда яки булмаганда өстәлде (200 яки 400μg / mL) өстәмә 24 с.

2.3.2. Азот оксиды (NOК), Простагландин E2 (PGE2), шеш некрозы факторы-α(ТНФ-α), һәм Интерлеукин-6 (IL-6) җитештерү

Күзәнәкләр SDE белән эшкәртелде һәм LPS белән 24 сәг. Элеккеге тикшеренүләр буенча Гриесс реагенты ярдәмендә нитритны үлчәү белән бернинди производство анализланмады [12]. Ялкынлы цитокиннар сере PGE2, TNF-α, һәм IL-6 җитештерүче күрсәтмәсе буенча ELISA комплекты (R&D системалары) ярдәмендә билгеләнде. SDEның NOК һәм цитокин җитештерүгә тәэсире 540 нм яки 450 нм Wallac EnVision ярдәмендә билгеләнде™микроплит укучы (ПеркинЭльмер).

2.4. Антиостеоартрит эшчәнлеген бәяләүVivo

2.4.1. Хайваннар

Ир-ат Спрага-Давли тычканнары (7 атна) Самтако Inc (Осан, Корея) сатып алынган һәм контроль шартларда 12 с яктылык / караңгы цикл белән урнаштырылган.° C һәм% дым. Кычытканнар лаборатория диетасы һәм су белән тәэмин ителгәнреклама. Барлык эксперименталь процедуралар Милли Сәламәтлек Институты (NIH) күрсәтмәләре нигезендә башкарылды һәм Daejeon университетының Хайваннарны карау һәм куллану комитеты тарафыннан расланды (Daejeon, Корея республикасы).

2.4.2. Кычытканнарда ОИ белән индукция

Хайваннар ранимизацияләнде һәм өйрәнү башланганчы дәвалау төркемнәренә билгеләнде (төркемгә). ЭЭМ чишелеше (3 мг / 50μL 0,9% тозлы) турыдан-туры уң тезнең артикуляр киңлегенә, кетамин һәм ксилазин катнашмасы белән ясалган анестезия астында укол ясадылар. Кычыткан очраклы рәвештә дүрт төркемгә бүленде: (1) тозлы группа, 2) МИА инъекциясе белән, 3) SDE белән эшкәртелгән төркем (200 мг / кг) MIA инъекциясе белән, һәм (4) ) индометасин- (IM-) эшкәртелгән төркем (2 мг / кг) MIA инъекциясе белән. Кычытканнар телдән SDE һәм IM белән 4 атна эчендә MIA инъекциясенә 1 атна кала бирелгән. Бу тикшеренүдә кулланылган SDE һәм IM дозасы алдагы тикшеренүләрдә эшләнгәннәргә нигезләнгән иде [10,13,14].

2.4.3. Хиндпау авырлыгын тарату үлчәүләре

ОА индукциясеннән соң, арткы кулларның авырлык күтәрү сәләтендәге оригиналь баланс бозылды. Инвалидлык сынаучы (Линтон инструменты, Норфолк, Бөекбритания) авырлык күтәрүче толерантлык үзгәрүләрен бәяләү өчен кулланылды. Кычытканнарны үлчәү камерасына җентекләп урнаштырдылар. Арткы кул белән ясалган авырлык күтәрүче көч уртача 3 с вакыт эчендә. Авырлыкны бүлү коэффициенты түбәндәге тигезләмә белән исәпләнде: [уң арткы аяктагы авырлык / (уң арткы аяктагы авырлык + сул арткы аяктагы авырлык)] × 100 [15].

2.4.4. Серум цитокин дәрәҗәләрен үлчәү

Кан үрнәкләре 1500 г температурада 4 минутта 10 минутта центрификацияләнде; аннары зарум җыелган һәм кулланылганчы −70 ° C сакланган. IL-1 дәрәҗәләреβ, IL-6, TNF-α, һәм зарардагы PGE2 җитештерүче күрсәтмәсе буенча R&D Systems (Minneapolis, MN, АКШ) ELISA комплектлары ярдәмендә үлчәнде.

2.4.5. Реаль вакыт санлы RT-PCR анализы

Гомуми РНК тез буын тукымаларыннан TRI реагенты ярдәмендә алынган (Сигма-Алдрич, Сент-Луис, МО, АКШ), кире CDNAга күчерелгән һәм PCR көчәйтелгән TM One Step RT PCR комплекты SYBR яшел (Гамәли биосистемалар). , Гранд Айленд, Нью-Йорк, АКШ). Реаль вакыт санлы PCR кулланылган биосистемалар 7500 реаль-вакыт PCR системасы ярдәмендә башкарылды (Гамәли биосистемалар, Гранд Айленд, Нью-Йорк, АКШ). Праймер эзлеклелеге һәм тикшерү эзлеклелеге таблицада күрсәтелгән1. CDNA үрнәкләренең аликотлары һәм тигез күләмдә GAPDH cDNA TaqMan® универсаль PCR мастер катнашмасы белән җитештерүче күрсәтмәләре буенча ДНК полимерасы булган катнашма белән көчәйтелде (Гамәли биосистемалар, Фостер, Калифорния, АКШ). PCR шартлары 2 минут 50 ° C, 10 минут 94 ° C, 15 s 95 ° C, 40 цикл өчен 1 минут 60 ° C. Максатлы генның концентрациясе җитештерүче күрсәтмәләре буенча чагыштырма Ct (көчәйтү участогы һәм бусага арасындагы кисешкән ноктада) ысулы ярдәмендә билгеләнде.

FOB бәясе:АКШ $ 0,5 - 9,999 / кисәк

Мин.Ордер саны:100 кисәк / кисәк

Тапшыру сәләте:Айга 10000 кисәк / кисәк